蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测

摘要：

【摘要】利用pIRES2-EGF和pMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)构建逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP。采用磷酸钙法将pMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒。通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况。结果显示,成功构建了逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105 cfu/mL;PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中。
【关键词】蜘蛛拖丝蛋白基因；逆转录病毒载体；重组逆转录病毒；
【基金】国家自然科学基金资助项目(30771538,31000990,30771538)

引言：

【引言】蜘蛛拖丝具有独特的力学特性。由于蜘蛛属肉食性动物，因此难以通过密集饲养获取大量蜘蛛丝蛋白。随着对蜘蛛丝的化学组成和分子结构的不断了解，特别是自Ｘｕ等克隆获得蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列ｓｐｉｄｒｏｉｎｌ以来，有关人工获得蜘蛛拖丝蛋白的相关研究备受关注。迄今为止，尚未见到有关利用逆转录病毒转基因法通过动物组织获取蜘蛛拖丝蛋白的研究报道。本试验利用前期工作中人工合成的蜘蛛拖丝蛋白基因２Ｓ，通过ＩＲＥＳ和报告基因ＧＦＰ相连后插入到逆转录病毒载体ｐＭＸ中，构建ｐＭＸ－２Ｓ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ逆转录病毒载体，通过包装细胞获得整合有蜘蛛拖丝蛋白基因，并能有效感染其他体细胞的重组逆转录病毒，为开展通过转基因动物获得类蜘蛛丝蛋白奠定基础。

作者：

安铁洙；宁方勇；王春生

作者单位：

东北林业大学生命科学学院；东北农业大学动物科学技术学院；