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雏鸡肠组织中CD44的鉴定及时空表达特性

中国兽医学报
Chinese Journal of Veterinary Science
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摘要:
【摘要】 为了解CD44分子在雏鸡肠组织内的表达及其时空表达特性,设计1对引物,建立RT-PCR方法对CD44mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡CD44基因表达水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量(Q-PCR)方法,对1~28日龄商品鸡肠组织不同部位中CD44mRNA表达水平进行检测。结果显示,从鸡肠组织中成功鉴定出CD44mRNA,建立的荧光定量方法能特异性检测到CD44mRNA,CD44和GAPDH基因的扩增效率分别为95%和101%,线性范围均在108~104拷贝/μL,敏感度高,最低检测限分别为45和77个拷贝。建立的CD44SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点。雏鸡不同日龄,不同肠组织中CD44表达水平有所差异,5~20日龄时的空肠组织和5~10日龄时的直肠组织中CD44表达量较高。
【关键词】 雏鸡; CD44; SYBRGreenI; 荧光定量PCR;
【基金】 国家自然科学基金资助项目(30972187)
引言:

【引言】许兰菊等于2004年首次报道鸡志贺菌病例,主要以雏鸡脓血痢为特征,病死率可达3.84%~33.3%,耐过鸡生长缓慢。对我国部分地区有不同程度腹泻病史的鸡群进行志贺菌感染血清流行病学调查发现,鸡志贺菌血清抗体阳性率达28.3%(155/547)~33.7%(226/670),说明鸡志贺菌感染已成为我国鸡群发生腹泻疾病的重要病因之一。病原学研究发现,该致病菌在生物学及血清学特性等方面与人源志贺菌完全相同,表明志贺菌能在人禽间交互传播,暗示着公共卫生和人类健康又面临新的挑战。CD44分子是细胞表面重要的分化抗原,作为一种细胞黏附分子,发挥着多种功能。Skoudy等和Lalont等均发现,人源志贺菌通过ipaB蛋白和细胞表面蛋白CD44特异性结合,从而介导志贺菌侵袭人肠上皮细胞并造成感染发病的。目前家禽中CD44研究报道较少,Catherine等曾用单抗技术鉴定鸡胚早期发育过程中CD44的分泌情况。然而,志贺菌的主要侵袭部位在肠组织,目前家禽肠组织中CD44的表达情况尚未见报道。本试验拟通过RT-PCR 方法鉴定肠组织中是否表达CD44,另外通过荧光定量PCR(Q-PCR)进一步研究雏鸡肠组织中CD44分子的时空表达特性,从而为研究CD44在志贺菌侵袭鸡肠上皮细胞中的作用及感染鸡的机制奠定基础,以期阐明人源志贺菌获得感染鸡的能力及宿主谱扩大的机制。

作者:
吕文强;师润;陈陆;张金来
作者单位:
河南农业大学禽病研究所;

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