鸭源新城疫病毒NP蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立

摘要：

【摘要】根据GenBank发表的鸭源新城疫病毒SDWF02株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物,扩增出鸭源新城疫病毒的NP基因,与原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET28a-NP,经鉴定后转化Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表明,54 000的融合蛋白得以表达,该蛋白能与鸭源新城疫的阳性血清发生特异性的反应。以纯化的重组蛋白为包被抗原,建立检测鸭源新城疫抗体的间接ELISA方法,经方阵滴定确定最佳包被质量液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,最佳包被质量浓度为10ng/孔,血清最佳稀释度为1∶1 000。经应用试验表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,为临床检测鸭源新城疫抗体水平提供了一种简单、准确、快速的诊断方法。
【关键词】鸭源NDV； NP蛋白；原核表达； ELISA；
【基金】现代农业产业技术体系专项资金资助项目(CARS-43-34);国家公益性行业(农业)科研专项基金资助项目(201003012);山东省科技攻关资助项目(2007GG30009001);山东省科技发展项目(鸭源副黏病毒致病性研究)

引言：

【引言】新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是由新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）引起的以感染禽类为主的一种急性、高度接触性传染病。该病以消化道和呼吸道病变为主要特征，发病率和死亡率高，给养禽业带来了严重的危害。以往资料表明，鸭和鹅等水禽对新城疫病毒多呈隐性感染。１９９７年，王永坤等从患病鹅体内分离到ＮＤＶ强毒株，从此打破了ＮＤＶ对水禽的不致病之说。近年来，鸭群发生新城疫在我国多个省市均有报道，且呈上升趋势，对养鸭业造成重大的经济损失。

作者：

程彦丽；刁有祥；张坤

作者单位：

山东农业大学动物科技学院；