鸭黄病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要：

【摘要】根据鸭黄病毒E蛋白基因序列设计了1对特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光定量RT-PCR检测鸭黄病毒的方法。根据含鸭黄病毒目的扩增片段的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线(Y=-3.39 X+43.18,r=0.973)。该方法具有特异性,对鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、腺病毒、鸭瘟病毒、猪乙脑病毒的核酸都没有扩增反应。敏感性试验显示,建立的此方法最低可检出1.9个TCID50病毒核酸。该方法对5只健康雏鸭人工感染86h后的组织器官样品(盲肠扁桃体除外)的检测结果均为阳性,与病毒分离鉴定的阳性符合率为100%。结果表明,该方法真实可靠,而且从核酸提取到报告检测结果耗时不超过3h,为鸭黄病毒病提供了一种敏感特异的定量检测方法。
【关键词】鸭黄病毒；实时荧光定量RT-PCR； TaqMan探针；

引言：

【引言】自２０１０年４月以来，在我国大部分养鸭地区陆续发生了一种以感染种鸭和雏鸭为主的新疫病。产蛋鸭表现以产蛋严重下降为主，随着病程的延长在发病后期出现一定比例神经症状的鸭，雏鸭表现以站立不稳、倒地不起等神经症状为主。本实验室通过临床剖检和病理组织切片分析，结合病原分离鉴定、血清学检测和分子序列测定等，已初步确定危害种鸭和雏鸭的病原为同一种新病毒即鸭黄病毒。与相关领域的学者命名的鸭出血性卵巢炎（Ｄｕｃｋｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｏｖａｒｉｔｉｓ，ＤＨＯ）为同一种病原，与坦布舒病毒的同源性极高。到目前为止，此病给我国养鸭业造成了严重的经济损失。实时荧光定量ＲＴＰＣＲ具有特异性强、定量准确、重复性好、高通量易操作等优点，已成为一种越来越重要的检测手段。本试验根据鸭黄病毒的Ｅ蛋白基因序列设计引物和探针，建立了用于检测鸭黄病毒的实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法并对此方法进行了初步应用。

作者：

高凤；于可响；马秀丽

作者单位：

山东农业大学动物科技学院；山东省农业科学院家禽研究所；华南农业大学动物医学院；