表达α-烯醇化酶重组腺病毒的构建及其在籽鹅卵泡颗粒细胞中的过表达

摘要：

【摘要】为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中。采用PacⅠ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒。实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1011pfu/mL。将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p<0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础。
【关键词】 α-烯醇化酶；重组腺病毒；颗粒细胞；
【基金】黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD20116)

引言：

【引言】禽类的产蛋性能主要取决于卵巢中卵泡的生长发育水平，并受品种、环境和饲养管理等因素的影响。籽鹅是世界上产蛋性能最好的鹅品种之一，研究籽鹅卵泡发育的调控机制具有重要的意义。本实验室利用产蛋前期(5 月龄)和产蛋期(8 月龄)籽鹅卵巢组织，获得产蛋期籽鹅卵巢组织高表达的26 个差异表达序列标签(Expressed sequence tags，ESTs) ，并对其进行实时荧光定量PCR 检测，表明籽鹅快速生长的卵泡中α- 烯醇化酶(α-Enolase，ENO1)相对表达量显著高于原始卵泡，通过生物信息学分析，推测ENO1 可能对鹅卵泡发育具有重要调控作用。

作者：

计红

作者单位：

黑龙江八一农垦大学动物科技学院；