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崂山奶山羊Myostatin基因真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的表达研究

中国畜牧兽医
China Animal Husbandry & Veterinary Medicine
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摘要:
【摘要】 试验克隆了崂山奶山羊Myostatin基因序列,构建了其真核表达载体,并验证了其在成纤维细胞中的表达。本研究通过从崂山奶山羊肌肉组织中提取RNA,反转录后采用巢式PCR方法扩增出Myostatin基因序列,构建真核表达载体,通过转染成纤维细胞,采用RT-PCR方法验证其表达。结果表明,克隆出崂山奶山羊Myostatin基因的全长cDNA序列,大小为1128bp,GenBank登录号:GU377303.1;构建pcDNA-MSTN真核表达载体,转染成纤维细胞48h后通过RT-PCR检测,结果显示,Myostatin表达量显著增加,表明成功构建pcDNA-MSTN真核表达载体,为进一步研究Myostatin的生物学功能及转基因羊培育奠定基础。
【关键词】 崂山奶山羊; 肌肉生长抑制素; 真核表达载体; 成纤维细胞; 巢式PCR;
引言:

【引言】肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)又名GDF8(growth differentiation factor 8),属TGF-β(transforming growth factor beta)超家族(Mcpherron等,1997),是肌肉生长发育的负调控因子。该基因突变的皮尔蒙特和比利时蓝牛具有显著“双肌”现象(Kambadur等,1997),实验室培育的Myostatin基因沉默的鼠(Magee等,1997)及斑马鱼(Lee等,2009)肌肉也明显增生。另有相关研究结果表明,Myostatin在脂肪沉积中也发挥着重要的作用(Mcpherron等,2002;Lee等,2007;Reisz-Porszasz等,2003),但尚无明确定论。崂山奶山羊是中国培育成功的优良奶山羊品种之一,该羊体质结实,结构匀称,产奶量高。为进一步提高崂山奶山羊的肉用性能,培育出产肉性能较高的奶肉兼用的崂山奶山羊,研究Myostatin在脂肪沉积中的作用,本研究欲克隆出崂山奶山羊的Myostatin 基因,构建真核表达载体,为后期研究提供基础。

作者:
唐大运
作者单位:
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

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