鸭疫里氏杆菌吉林分离株camp基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要：

【机构】吉林农业大学动物科技学院；长春市动物疫病预防控制中心；中国兽医药品监察所；

【摘要】为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp重组表达质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达出分子量约为37 ku重组蛋白,western blot分析结果表明该蛋白能够与血清1、2、10、11和17型RA全菌体阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,结果显示其具有良好的特异性和重复性,与RA超声裂解抗原ELISA方法的符合率达到77.5%。研究结果进一步验证了Camp蛋白具有良好免疫原性,并且为RA多种血清型共同抗原,在RA的检测及亚单位疫苗开发中具有良好的应用价值。
【关键词】鸭疫里氏杆菌； camp基因；克隆与表达； ELISA；
【基金】吉林省科技发展计划项目(20110230);吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(201348)

引言：

【引言】鸭疫里氏杆菌病是目前影响养鸭业最为严重的细菌性传染病，在世界各养鸭地区几乎均有流行，尤其在鸭饲养密度高的东南亚地区，发病情况尤为严重。控制该病最有效的措施是全菌体灭活油佐剂疫苗免疫预防，对同血清型菌攻毒保护率可达100 % 。但因其病原鸭疫里氏杆菌(Riemerellaanatipestifer，RA)血清型众多及血清型间缺乏交叉保护，限制了灭活油佐剂苗的应用，因此开发RA 的亚单位疫苗成为解决此问题的关键。Camp 是一种唾液酸糖蛋白，具有促进溶血素溶血功能的作用，已被初步证明是RA 可能的毒力因子，并且在各血清型菌间具有很高的同源性和保守性，在部分血清型菌株间具有反应原性。为评价该蛋白用于亚单位疫苗开发及诊断的潜在价值，本研究以吉林奥白星鸭分离鉴定的JL-1 RA 的DNA 为模板，克隆camp 基因并进行原核表达，利用western blot 进一步验证该Camp 是众多血清型RA 菌株共有的具有良好反应原性和免疫原性蛋白；同时以Camp 表达蛋白为包被抗原建立间接ELISA 检测方法，为鸭RA 的流行病学调查、亚单位疫苗的开发提供有效的方法和实验依据。

作者：

么乃全

作者单位：

吉林农业大学动物科技学院；