甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

摘要：

【摘要】自甲型H1N1(2009)流感病毒于2009年在世界多个国家暴发流行后,许多国家的猪群中检测到该病毒的存在,因此建立快速准确的甲型H1N1流感病毒的检测方法成为迫切需求。本研究针对甲型H1N1(2009)流感病毒NA基因设计特异性引物和探针,建立甲型H1N1(2009)流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间试验验证该方法在实际应用中的效果。结果表明:本研究建立的方法对检测甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的灵敏度达到10-6,与WHO推荐的A型流感病毒实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致,并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);该方法特异性强,与经典型H1N1和其他亚型流感病毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对,检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明,所建立的方法准确可靠。本研究所建立检测方法快速灵敏,检测结果准确可靠,适合用于甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。
【关键词】甲型H1N1(2009)流感病毒；实时荧光RT-PCR；快速检测；
【基金】深圳市地方性标准制订项目(2010年安全类46);深圳出入境检验检疫局青年科技计划(SZ2011201)

引言：

【引言】在甲型流感病毒H1N1(2009)暴发流行期间，许多国家均有人源病毒感染猪的报道。甲型H1N1(2009)病毒在猪体内可以发生变异和重组，进而产生具有潜在危害的新毒株。加强猪群中猪流感病毒(Swine influenza virus， SIV)、尤其是甲型H1N1(2009)流感病毒(Pandemic H1N1 2009)的检测和监测显得非常迫切。WHO、OIE 和FAO 联合要求对猪群中甲型H1N1(2009)流感病毒进行监测，并能够与其他病毒株进行鉴别，以评估甲型H1N1 (2009)病毒株与其他病毒株重组的风险。

作者：

秦智锋

作者单位：

深圳出入境检验检疫局；