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猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定

中国预防兽医学报
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
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摘要:
【摘要】 为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1)。SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6%和3.4%,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础。
【关键词】 猪圆环病毒2型; 猪O型口蹄疫病毒; Cap蛋白; VP1蛋白; 共表达;
【基金】 国家863计划(2011AA10A208);公益性行业(农业)专项(201203039);国家自然科学基金(31101837)
引言:

【引言】猪圆环病毒2 型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,为单股环状DNA 病毒,直径为17 nm,基因组约1.7 kb。PCV2 含有两个主要的开放阅读框(ORFs),其中ORF1 编码与病毒复制相关的蛋白Rep 和Rep',ORF2 编码病毒的结构蛋白Cap。PCV2-Cap 蛋白是病毒的主要免疫保护性抗原,能够诱导机体产生特异性免疫应答,是研制基因工程亚单位疫苗的理想靶抗原。口蹄疫病毒(Foot andmouth disease virus,FMDV)是感染偶蹄目动物的重要病原,为单股线状RNA 病毒,直径为20 nm~25 nm,基因组约8.5 kb。FMDV 衣壳蛋白由VP1、VP2、VP3 和VP4 4 种结构蛋白各60 个分子组成,其中VP1 蛋白包含病毒的主要抗原位点,为病毒的主要免疫原性蛋白,能够诱导机体产生中和抗体。研究表明,利用重组蛋白研制的亚单位疫苗对PCV2 和FMDV 感染具有良好的免疫效果,因此研制同时预防这两种病毒性疫病的二联亚单位疫苗具有重要意义。本研究采用杆状病毒双表达系统,共表达PCV2-Cap 和FMDV-VP1 蛋白,为进一步研制PCV2 与FMDV 二联亚单位疫苗奠定基础。

作者:
王一平
作者单位:
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室;

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