猪巨细胞病毒gB基因的原核表达与间接ELISA检测方法的建立

摘要：

【摘要】猪巨细胞病毒(PCMV)是引起新生仔猪死亡、鼻炎、肺炎和生长速度减缓的重要病原之一,我国尚无有效的诊断方法。为建立检测PCMV的ELISA方法,本研究以重组PCMV囊膜糖蛋白B(gB蛋白)为包被抗原,优化反应条件:抗原包被量0.4μg/mL,待检血清稀释度1∶100,37℃包被2 h后4℃过夜,5%脱脂乳37℃封闭2 h,二抗1∶10 000稀释,37℃作用2 h,抗体临界值为S/P≥0.354判为阳性,S/P≤0.295判为阴性,介于二者之间为可疑,建立了PCMV抗体间接ELISA检测方法。与猪瘟、猪伪狂犬病、猪附红细胞体病、副猪嗜血杆菌及猪圆环病毒2型等血清抗体无交叉反应,批间和批内重复性较好,对江苏省259份仔猪血清样品进行检测,抗体阳性率达56.76%,从而为PCMV检测和流行病学调查提供了有效方法。
【关键词】猪巨细胞病毒；重组囊膜糖蛋白B；原核表达；间接ELISA；
【基金】农业部公益性行业专项(201003030-4、201203039);国家生猪产业体系专项(CARS-36)

引言：

【引言】猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus，PCMV)属于疱疹病毒科β 病毒亚科，可以引起新生仔猪死亡、鼻炎、肺炎和生长速度减缓。该病毒在世界范围内分布广泛，血清抗体阳性率很高。PCMV 抑制宿主的免疫功能和防御机制，尤其是抑制T 细胞功能，继发其他病菌感染。此外，猪被认为是异种器官移植的良好供体，PCMV 在器官移植中备受关注，非人类的灵长类动物受体器官中曾检测到PCMV。因此，建立一种灵敏、快速的PCMV 检测方法十分必要。本研究对PCM 的糖蛋白B(gB)进行原核表达作为包被抗原，建立了检测PCMV 血清抗体的间接ELISA 方法，为血清抗体的流行病学检测奠定基础。

作者：

朱月华；刘捷

作者单位：

南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点开放实验室；