甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

【摘要】为建立快速检测甲型H1N1流感病毒[Influenza A(H1N1)pdm09]的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究根据甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因保守序列,设计并合成了特异性引物和TaqMan MGB探针,采用实时荧光定量PCR技术检测甲型H1N1流感病毒。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD-HA标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,敏感性可达50 TCID50。本研究中,甲型H1N1流感病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法与经典H1N1、类禽H1N1、类人H1N1、H1N2、H3N2、H5N1和H9N2流感病毒无交叉反应。结果表明,该方法可以在人类和动物间有效地检测甲型H1N1流感病毒。
【关键词】猪流感病毒； H1N1亚型； TaqManMGB探针；实时荧光定量PCR；
【基金】哈尔滨市科技攻关计划(2009AA6BN078);中欧科技合作项目(1112)

引言：

【引言】猪流感(Swine influenza，SI) 是由SI 病毒(SIV)引起的一种急性高度接触传染性呼吸道疾病。猪被认为是流感病毒的“混合器”，它能够促进禽、猪和人流感病毒的重组，并产生可能引起在人群中大流行的新型病毒株。不同亚型的SIV 感染人事件时有发生。2009 年爆发的甲型H1N1 流感病毒中，SIV 提供了多个基因片段。近年来在我国分离的SIV 主要包括：经典型(CS) H1N1、北美三源重组型(TR) H1N2、欧洲类禽(EA) 型H1N1 流感病毒。国内外流行病学调查显示甲型H1N1 流感病毒(pdm/09)在猪体内已经适应和流行，鉴于猪在流感病毒种间传播中的作用，控制猪群感染甲型H1N1 流感病毒的数量，是降低人感染甲型H1N1 流感病毒风险最重要的措施之一，而敏感特异的快速诊断方法是实现这一目标的重要手段。

作者：

尹航；杨焕良

作者单位：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室；东北农业大学；