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牛MyoG基因启动子的克隆及功能的初步分析

畜牧兽医学报
Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences
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摘要:
【摘要】 本研究旨在比较日本和牛MyoG基因的不同长度片段启动子的活性强弱并初步探讨其中的机制。根据GenBank已公布的牛MyoG基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增日本和牛MyoG基因的一系列启动子缺失序列,构建重组克隆载体pMD18-T-MyoGpro,对阳性克隆进行限制性酶切鉴定、测序及生物信息学分析,进而构建一系列启动子缺失片段的pGL3-MyoGpro双荧光素酶表达载体,转染牛肌源干细胞(MDSCs)和牛胎儿成纤维细胞,并进行双报告基因活性检测。结果表明,日本和牛MyoG基因的166~2 125bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛肌源干细胞中的表达,且具有肌肉特异性。通过生物信息学分析得知日本和牛MyoG启动子序列中有1个TATA盒,15个E-box,并可能含有MyoD、MEF2、MEF3、MTBF、TEF1、PRDF、Sp1、多个SRF、ERE、GRE及多个Oct-1等转录因子调控结合位点,本试验通过比较不同长度启动子片段的活性并结合对上述转录因子的分析,认为这些转录因子可能对启动子活性起着重要的调控作用。对牛MyoG基因启动子的克隆与功能和序列分析为进一步研究MyoG基因的表达调控奠定了基础。
【关键词】 MyoG基因; 启动子序列; 转染; 双报告检测; 肌肉特异性; 生物信息学分析;
引言:

【引言】肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因是生肌调节因子(Myogenic regulatory factors,MRFs)家族的成员之一。该家族由生肌决定因子(Myogenicdetermining factor,MyoD), 生肌调节因子4(MRF4),肌细胞生成素和生肌因子5(Myogenicfacor 5,MYF5)组成。MyoD和MyoG是一类肌调节蛋白,其中MyoD确定肌源性的发生,MyoG诱导骨骼肌的末端分化。Weintraub等的研究表明,单独敲除MyoG 基因的小鼠会由于严重的骨骼肌发育缺陷而死亡,而单独敲除其他3个基因的小鼠骨骼肌发育均正常。作为一种肌细胞特异性转录因子,MyoG具有以下功能:(1)调节自身基因的表达;(2)与生肌因子其他成员相互作用,如MyoG 基因可调节MRF4基因的表达;(3)调节肌肉特异基因如肌肉肌酸激酶、肌钙蛋白、肌球蛋白轻链基因的表达。MyoG作为转录调节因子,其表达启动了一系列骨骼肌特异的胚胎性受体和收缩蛋白(如胚胎型烟碱样乙酰胆碱受体、胚胎型trponin亚基、胚胎型肌球蛋白重链等)的合成,因此MyoG 是唯一的无可替代的生肌调节因子。1989年,Wright等首先报道了该基因,随后又有大量有关该基因突变与人类疾病关系的研究。目前国内外主要集中在肌肉形成机理等方面的研究,但对MyoG 基因的表达和调控,MyoG 启动子的功能和调控等的研究较少,对牛MyoG 基因启动子的功能和调控方面的研究还未见报道。

作者:
王秋华;曹允考;李树峰;佟慧丽
作者单位:
东北农业大学生命科学学院; 内蒙古大学生命科学学院;

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