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宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达

中国畜牧兽医
China Animal Husbandry & Veterinary Medicine
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摘要:
【摘要】 本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。
【关键词】 宇佐美曲霉; 木聚糖酶; 哺乳动物细胞; 分泌表达;
引言:

【引言】植物细胞壁主要是由纤维素(cellose)、半纤维素(hemicellose)和木质素(lignin)等物质组成,半纤维素是仅次于纤维素含量第二丰富的可利用自然资源,其主要成分是木聚糖(Lutting等,1997),它是仅次于纤维素含量的第二丰富的可再生多糖(Collins等,2004;Ruanglek等,2007;Zhou等,2008),约占植物细胞干重的15%~35%(崔罗生,2008)。木聚糖酶是一种分解木聚糖的酶,可将木聚糖分解为木糖,木聚糖酶在饲料、食品、造纸、纺织和能源等工业中显示出广阔的应用前景(周晨妍等,2005),其中一个较重要的用途是作为饲料添加剂应用于饲料行业。半纤维素的主要成分木聚糖是一种非淀粉多糖(NSP),不能被单胃动物消化;具有可溶性,可导致单胃动物的小肠黏度提高,最终使消化受阻。木聚糖酶能破坏植物的细胞壁,将木聚糖分解成木糖,为动物利用;并降低肠内的黏度,提高饲料利用率。因此,在用于饲料的酶制剂中,该酶扮演重要角色(侯炳炎,2002)。目前使用的木聚糖酶主要是利用米曲霉、黑曲霉、芽孢杆菌和酵母菌等发酵后,经提取、浓缩等工艺加工而成(Zhou等,2008)。宇佐美曲霉木聚糖酶属酸性木聚糖酶,具有高比活性,最适pH 4.2,最适反应温度50℃(孙军亭等,2008)。

作者:
张茂;邹娴;林纯
作者单位:
广东省农业科学院畜牧研究所畜禽育种国家重点实验室广东省动物育种与营养公共实验室; 华南农业大学动物科学学院;

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